光度計主要利用一束單色光以及樣品對該光的吸收或透射進行測量。在光源出發后，經過調節波長選擇器調節光的波長后進入樣品池（經過和未經過樣品的兩束光線被接收到），再進入檢測器檢測每組不同波長（或者說不同頻率的）的光的強度變化，最后通過計算樣品對光的吸收率計算目標物質的濃度或其他相關參數。

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